ОТЧЕТ по научным исследованиям за 1 курс, 1 семестр обучения
|
Направление подготовки |
06.06.01 — Биологические науки |
|
Направленность (специальность) |
03.03.03 — Микробиология |
|
Структурное подразделение ФИЦ КазНЦ РАН, Лаборатория |
Казанский институт биохимии и биофизики ФИЦ КазНЦ РАН |
|
Научный руководитель |
д.б.н., профессор Чернов В.М. |
|
Тема научно-квалификационной работы |
Создание рекомбинантных вирусных векторов для клеточно-опосредованной генной терапии онкологических заболеваний |
- Выполнение индивидуального плана научных исследований (за соответствующий период)
|
№ п/п |
Запланировано |
Выполнено (% выполнения) |
|
1 |
Разработка мультицистронной конструкции, несущей генетическую кассету TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed. Подтверждение правильности сборки генетической конструкции. |
100% |
|
2 |
Выделение мезенхимных стволовых клеток (МСК) из жировой ткани собаки, их характеристика. |
100% |
|
3 |
Получение МСК с одновременной сверхэкспрессией TRAIL, PTEN, IFN-β1 и DsRed. |
100% |
|
4 |
Подтверждение экспрессии рекомбинантных белков TRAIL, PTEN и IFN-β1 в генетически модифицированных МСК. |
100% |
|
5 |
Анализ влияния генетической модификации на пролиферативную активность, ультраструктуру и жизнеспособность МСК. |
100% |
- Краткое описание полученных на текущий момент результатов
Разработана мультицистронная конструкция, несущую генетическую кассету TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed. Проведено клонирование генетической кассеты в лентивирусный плазмидный вектор pLX303. Правильность сборки генетической конструкции подтверждена рестрикционным анализом. Получен рекомбинантный лентивирус LV-TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed, титр вируса составил 2,8×106 TU/мл. Из жировой ткани собаки выделены МСК, проведена их иммунофенотипическая характеристика, которая показала, что выделенные клетки экспрессируют основные маркеры мезенхимной стволовой клетки: CD105, CD10, Stro-1 и Thy-1. Показано, что выделенные МСК способны к направленной дифференцировке в адипо-, хондро- и остеогенном направлениях. Получены МСК собаки с одновременной сверхэкспрессией TRAIL, PTEN, IFN-β1 и DsRed путем их генетической модификации рекомбинантным лентивирусом LV-TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed. Проведена сортировка генетически модифицированных клеток с помощью проточной цитофлуориметрии по флуоресценции репортерного белка DsRed. Показано, что генетически модифицированные МСК собаки экспрессируют репортерный красный флуоресцентный белок DsRed. Проведен анализ влияния генетической модификации на жизнеспособность/пролиферативную активность (с использованием MTS-теста). Полученные результаты доложены на итоговой конференции КИББ ФИЦ КазНЦ РАН.
- Публикации по теме научно-квалификационной работы (за все время обучения, включая тезисы докладов):
|
№ п/п |
Библиографическое описание |
Название издания (отметить издания из перечня ВАК) |
|
|
|
|
- Апробация результатов научно-квалификационной работы (за все время обучения):
|
№ п/п |
Название конференции |
Тип доклада |
|
1 |
Итоговая конференция КИББ ФИЦ КазНЦ РАН |
Устный |
- Иные достижения аспиранта:
(участие в конкурсах, грантах, полученные премии, дипломы, именные стипендии и т.п. (указать, где получено и за что), стажировки)