Вы просматриваете редакцию с названием "Абдрахманова (Фазлеева) Ильмира Ильдаровна ОТЧЕТ по научным исследованиям за 1 курс, 2 семестр обучения", сохраненную 24.10.2019 в 14:05 в Ильмира Абдрахманова (Фазлеева) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
Заголовок | Абдрахманова (Фазлеева) Ильмира Ильдаровна ОТЧЕТ по научным исследованиям за 1 курс, 2 семестр обучения |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Содержимое | ОТЧЕТ по научным исследованиям за 1 курс, 2 семестр обучения
Проведена оптимизации кодонного состава генов TRAIL, PTEN и IFN-beta1 с использованием алгоритма OptimumGene. Синтез de novo нуклеотидных последовательностей кДНК генов TRAIL, PTEN и IFN-beta1 был осуществлен компанией GenScript (США). Нуклеотидные последовательности генов TRAIL, PTEN, IFN-beta1 и DsRed (красный флуоресцентный белок) были клонированы в плазмидный вектор-донор через нуклеотидные последовательности 2А пептида в следующем порядке TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-beta1-2A-DsRed, а также по отдельности. Далее было проведено субклонирование генетических кассет TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed, TRAIL, PTEN, IFN-β1, Katushka2S из вектора-донора pUC57 в лентивирусный плазмидный вектор pLX303 по технологии Gateway (Invitrogen, США) путем LR-рекомбинации по методике, рекомендуемой производителем. Проведена наработка векторных плазмид pLX303 с генетическими конструкциями TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed, TRAIL, PTEN, IFN-β1, Katushka2S для последующей сборки лентивирусов. Рекомбинантные лентивирусы LV-TRAIL-2A-PTEN-2A-IFN-β1-2A-DsRed, TRAIL, PTEN, IFN-β1, Katushka2S получали путем трансфекции пакующей линии клеток HEK293Т тремя плазмидами (оболочечная, упаковочная и векторная). Сбор вирусных супернатантов проводили 3 раза через каждые 12 часов. Концентрирование рекомбинантных лентивирусных частиц проводили методом ультрацентрифугирования. Полученную ранее клеточную линию МСК, генетически модифицированных рекомбинантным лентивирусом, кодирующим родственный фактору некроза опухоли апоптоз-индуцирующий лиганд собаки (TRAIL), интерферон бета-1 собаки (IFNB1) и фосфатазу с двойной субстратной специфичностью собаки (PTEN), отбирали путем культивирования в среде с бластицидином S (5 мкг/мл) в течение 10 дней. Экспрессия генов была подтверждена ПЦР в режиме реального времени. Для того, чтобы оценить противоопухолевую активность нативных и генетически модифицированных МСК, 2х105 МСК культивировали в течение 24 часов, затем собирали кондиционированную среду (КС). Клетки рака толстой кишки человека HCT-116 культивировали в свежей среде RPMI-1640, либо в КС от нативных или генетически модифицированных МСК. Через 48 часов пролиферативная активность клеток HCT-116, культивировавшихся в КС генетически модифицированных МСК, была значительно ниже (78,97±9,23%) по сравнению с клетками, культивировавшимися в КС нативных МСК (99,71±4,38%) и в свежей среде (100,00±4,36%).
(участие в конкурсах, грантах, полученные премии, дипломы, именные стипендии и т.п. (указать, где получено и за что), стажировки)
Подпись аспиранта
Подпись научного руководителя
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Отрывок |